Real-Time PCR - IAB

Polymerázová reťazcová reakcia – PCR („polymerase chain reaction“) je bežne využívaná metóda umožňujúca namnoženie určitého úseku DNA. Jednou z variácií štandardnej PCR metódy je real-time PCR (kvantitatívna PCR = qPCR) metóda, ktorá umožňuje kvantifikáciu vznikajúceho produktu po každom jednom cykle.

Kľúčovým prvkom každej PCR reakcie je DNA polymeráza, ktorá amplifikuje vlákno DNA v smere 5´ku 3´. Na iniciáciu amplifikácie je tiež potrebný primer, čo je krátky úsek DNA plne komplementárny s templátovým vláknom DNA.

Samotná PCR reakcia pozostáva z 3 hlavných krokov:

• Denaturácia – disociácia dvojvláknovej DNA pri teplote nad 90°C
• Anelácia – hybridizácia primerov ku komplementárnym úsekom templátovej DNA pri teplote 45 – 65°C
• Extenzia – polymerizácia vlákna DNA pri zvýšenej teplote – okolo 72°C

Tieto kroky sa opakujú v 20 až 40 cykloch a následne prebehne záverečná polymerizácia. Výsledkom celej reakcie je množstvo kópií pôvodných fragmentov DNA. Možnosť kvantifikácie amplikónov v reálnom čase umožňuje špeciálny termocyklér, ktorý vďaka detektoru fluorescencie meria zväčšujúce sa množstvo dvojvláknovej DNA alebo množstvo značky hybridizovanej k cieľovej sekvencii amplikónu. Priebeh PCR je znázornený graficky pomocou amplifikačnej krivky, pri ktorej os y znázorňuje hladinu detegovanej fluorescencie a os x poradie cyklu.

Súvisiace odkazy

REALIST DX - IAB

Prístroj je určený pre široké spektrum Real-Time PCR aplikácii v diagnostických aj life science laboratóriach

Trombofilné mutácie